本品系用磺胺喹噁啉（SQX）偶联蛋白的抗原、磺胺喹噁啉单克隆抗体和酶标记羊抗鼠及其它试剂制成。用于定量、定性检测猪组织、鸡组织、血清、尿液中磺胺喹噁啉的残留量。

【物理性状】试剂盒外观完整，内装试剂齐全。包被抗原的酶联板透明、干燥且用真空包装，磺胺喹噁啉抗体工作液、底物液、终止液、标准品、浓缩洗涤液、浓缩提取液为透明溶液，酶标记物为浅黄色溶液。试剂无菌检验均应合格。

【灵敏度测定】  取已包被好的酶标板12孔，每两孔分别加入0µg/L、1µg/L、3µg/L、9µg/L、27µg/L、81µg/L标准溶液各20µL，加入酶标二抗工作液50µL，再加入 SQX抗体工作液80µL，20~25℃反应1h，取出洗板5次，拍干。加入底物液(A液、B液)各50µL，避光20~25℃反应30min，用50µL终止液终止反应，置450nm波长处测定吸光度值。每一浓度标准溶液吸光度值（B）平均值除以第一个标准（0标准）吸光度值（B0）的平均值再乘以100%，即百分吸光度值。以SQX浓度（µg/L）的自然对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。

IC50 （即0浓度标准溶液的吸光度值50％处所对应的SQX浓度）范围应在1.67µg/L ~3.29µg/L之间。

【特异性测定】  取已包被好的酶标板18孔，每两孔分别加入0µg/L、1µg/L、3µg/L、9µg/L、27µg/L、81µg/L标准溶液和阴性猪肉样本提取液、25µg/kg和50µg/kg添加的阳性猪肉样本提取液各20µL，加入酶标二抗50µL，再加入SQX抗体工作液80µL，20~25℃反应1h，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50µL，避光20~25℃反应30min，用50µL终止液终止反应，置450nm波长处测定吸光度值。每一浓度标准溶液吸光度值（B）平均值除以第一个标准（0标准）吸光度值（B0）的平均值再乘以100%，即百分吸光度值。以SQX浓度（µg/L）的自然对数为X轴，百分吸光度为Y轴，绘制标准曲线图。从标准曲线中查出阴性猪肉样品和25µg/kg和 50µg/kg SQX添加的组织样品的测定浓度。

阴性猪肉样品测定值在5µg/kg以下，25µg/kg和50µg/kg SQX添加浓度回收率应在60.0％~110.0％之间。

      【精密度测定】  取已包被好的酶标板32孔，每两孔分别加入0µg/L、1µg/L、3µg/L、9µg/L、27µg/L、81µg/L标准溶液20µL，其它20孔加入9µg/L的标准溶液20µL，加入酶标二抗50µL，再加入SQX抗体工作液80µL，20~25℃反应1h，取出洗板5次，拍干。加入底物液（A液、B液）各50µL，避光20~25℃反应30min，用50µL终止液终止反应，置450nm波长处测定吸光度值。

20个微孔的9µg/L标准溶液的吸光度值变异系数（%）应≤25%（n=20）。

【适用范围】用于定量、定性检测猪或鸡组织（肌肉、肝脏）、血清、尿液中磺胺喹噁啉的残留量。

【用法和结果判定】

1. 溶液配制

1.1  2M 氯化钠溶液：称取11.69gNaCl    加入100ml水溶解。

1.2  0.02 M PB缓冲液：Na2HPO4·12H2O  2.58g

Na2HPO4·2H2O   0.44g

加入500ml水溶解。

1.3  稀释提取液：将20X浓缩提取液摇匀，用水以1：20比例稀释，临用前配制。

1.4  稀释洗涤液：将20X浓缩洗涤液摇匀，用水以1：20比例稀释，临用前配制。

2.  样本前处理

2.1   猪或鸡组织（肌肉、肝脏等）样本处理方法

2.1.1  取适量组织用匀浆机10000r/min匀浆1 min，称取（3±0.1）g匀浆物置离心管中，加入9mL乙腈-水溶液（84+16，v/v）混合，剧烈振荡10min。于15℃， 3000g以上速度离心10min；

2.1.2  取4mL上清液，加入2M氯化钠溶液2mL和7mL乙酸乙酯，混合振荡10min，15℃3000g以上速度离心5min；

2.1.3  将上层液移到离心管中用氮气吹干；（或鸡心瓶中，50℃减压蒸干）

2.1.4  加入正己烷1mL振荡1min，再用稀释了的提取液1mL混合2min。15℃，3000g，离心5min，除去上层液；

2.1.5   取20mL下层相进行分析。

2.2  血清样本处理方法

2.2.1  将加有抗凝血剂的血样本，于10℃，3000g以上离心10min。分离出血清或过滤血清；

2.2.2  取1mL血清，加入3mL 稀释了的提取液，混合后，取20mL进行分析。

2.3  尿液样本处理方法

2.3.1  将尿样本于10℃，3000g以上离心10 min。

2.3.2  取1 mL澄清的尿样，加入3 mL稀释了的提取液，混合。

2.3.3  取20μL进行分析。

3.  检测步骤

3.1将试剂盒从4℃冷藏环境中取出并将所需试剂从盒中取出，置于室温（20~24℃）平衡30 min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

3.2 取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自封袋，保存于2~8℃，不要冷冻。

3.3  编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做2

孔。

3.4  反应：往酶标板微孔中加标准溶液或试样溶液20 µL，加入酶标记物50 µL，再加入SQX单克隆抗体80µL，用盖板膜封板，20~25℃恒温箱中反应1h。倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，去除孔中液体。每孔加入250µL洗涤液，15秒后倒出孔中液体，用吸水纸拍干，如此重复操作共洗板5次。

3.5  显色：每孔加入A、B底物液各50µL，轻轻振荡混匀，20~25℃恒温箱避光显色30min。

3.6  测定：每孔加入终止液50µL，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测定每孔吸光度值（OD值）。

4.  结果判定

所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值(B0)再乘以100%，即百分吸光度值。

                   B
百分吸光度值（%）＝-  *100%
                   B0

以SQX浓度的自然对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法，计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软件，更便于大量样品的快速分析。

【贮藏条件和保存期】试剂盒应在2~8℃保存，保存期为六个月。

【规格】  每个试剂盒含96孔板一块；SQX标准品6瓶，1mL/瓶（0µg/L、1µg/L、3µg/L、9µg/L、27µg/L、 81µg/L）；SQX抗体工作液1瓶，10mL；酶标二抗工作液1瓶，7mL； 20倍浓缩洗涤液1瓶，40mL； 20倍浓缩提取液1瓶，50mL；底物液A液1瓶，7mL；B液1瓶，7mL；终止液1瓶，7mL；高浓度标准品（1µg/ mL）1瓶，1mL；盖板膜一张；自封袋1个；说明书1份；质量报告1份。

【注意事项】

1、试剂盒在缓冲液配制和液体分装上要做到无菌，防止试剂变质。

2、试剂盒标准品应经过严格配制后方可用于试剂盒中。

3、添加回收用的高浓度标准品需经过试剂盒自身标准验证，合格后方可用于特异性和准确度监控用。

4、格按照质量标准所述用法和结果判定内容进行试剂盒质量控制。

5、在试剂盒老化实验中出现有不合格现象，则视该批试剂盒为不合格。